ชื่อเต็มของตัวละครและตำแหน่งอยู่ด้านล่าง ชื่อที่เพื่อนร่วมงานและเพื่อนๆ เรียกกันจะใส่เครื่องหมายเน้นข้อความเอาไว้

• เจ้าหน้าที่พิสูจน์ที่เกิดเหตุ นักสืบระดับ 1 แม็ค เทย์เลอร์ - CSI Detective First Grade: Mac Taylor (แสดงโดย Gary Sinise) หัวหน้าทีม CSI ของซีรีส์นี้ เขาเกิดในเมือง ชิคาโก แม้กระทั่งเขาตัดสินใจมาทำงานที่ กรมตำรวจชิคาโก ยึดมั่นในหลัก ทฤษฎีควอนตัม ในสาขาฟิสิกส์ ที่ว่า "ทุกสิ่งทุกอย่างล้วนสัมพันธ์เกี่ยวโยงกัน" และใช้มันในการไขปริศนาคดีที่สลับซับซ้อนเสมอมา การเสียชีวิตของภรรยา แคลร์ คอนราร์ด เทย์เลอร์ จากเหตุการณ์วินาศกรรม 11 กันยายน พ.ศ. 2544 ได้เป็นปัญหา อาการนอนไม่หลับ ของเขาในเวลาต่อมา เขาเคยรับราชการตำแหน่งร้อยโท ในหน่วย นาวิกโยธิน กองทัพเรือ สหรัฐอเมริกา เขาสนิทสนมกับสเตลล่า โบนาเซร่า และงานอดิเรกของเขา ก็คือ การเล่นกีต้าร์เบส ที่ คลับดนตรีแจส ทุกคืนวันพุธ ซึ่งความสามารถนี้ถูกค้นพบโดย ลินด์เซย์ มอนโร ในระหว่างการสืบสวน และเขาก็รู้วิธีการเล่นเครื่องดนตรีชนิดนี้ รวมทั้งรู้ถึงวิธีการถือดาบซามูไรญี่ปุ่น และธนูอีกด้วย ในฤดูกาลที่ 3 มีความสัมพันธ์อย่างเปิดเผยกับ ด็อกเตอร์ เพย์ตัน ดริสคอล ฤดูกาลที่ 4 เขาได้รับโทรศัพท์ลึกลับตอนเวลา 3.33 น. เป็นประจำ โดยค้นพบว่า โทรศัพท์ลึกลับนี้รู้แต่เพียงว่าเป็นมาจากบุคคลลึกลับเลข 333 ซึ่งภายหลังก็คือ ดรูว์ เบดฟอร์ด และในขณะเดียวกัน ด็อกเตอร์ เพย์ตัน ดริสคอล ตัดสินใจที่จะอยู่ ลอนดอน และไม่กลับมาที่ นิวยอร์ก อีก ตอน Down The Rabbit Hole อาการนอนไม่หลับของเขาเริ่มแย่ลง อันเนื่องมาจาก โทรศัพท์ลึกลับตอนเวลา 3.33 น. และเขาได้เล่าเรื่องให้กับ ดอน แฟล็ค เกี่ยวกับการที่ ด็อกเตอร์ เพย์ตัน ดริสคอล ตัดสินใจที่จะอยู่ ลอนดอน ตอน Hostage เขาถูกจับเป็นตัวประกันในธนาคารโดย อีธาน สก๊อตต และ ตื่นขึ้นมาอย่างไม่ได้สติในรถใต้น้ำ ในฤดูกาลที่ 5 ตอน Veritas

• เจ้าหน้าที่พิสูจน์ที่เกิดเหตุ นักสืบระดับ 1 โจเซฟฟิน "โจ" แดนวิลล์ - CSI Detective First Grade: Josephine "Jo" Danville (แสดงโดย Sela Ward) สมาชิก CSI คนใหม่ ที่มาแทน สเตลล่า โบนาเซร่า เคยทำงานเป็นเจ้าหน้าที่ FBI ที่ เวอร์จิเนีย มาก่อน เธอมีความเชี่ยวชาญในการหาหลักฐานทาง DNA มุมมองด้านปรัชญาของเธอจะมองทุกคนว่า เป็นผู้บริสุทธิ์ไว้ก่อน จนกว่าจะมีการพิสูจน์ทางด้านวิทยาศาสตร์ อย่างไรก็ตาม เธอเองก็มีภูมิหลัง ทางด้านจิตวิทยาทางอาญาด้วย เธอมีบุตรบุญธรรมหญิง 1 คน การมาถึงที่แล็บอาชญากรรม ทำให้เธอตกใจเมื่อพบศพอยู่บนพื้น ที่แล็บอาชญากรรม ในฤดูกาลที่ 7 ตอน The 34th Floor

• เจ้าหน้าที่พิสูจน์ที่เกิดเหตุ นักสืบระดับ 3 แดนนี่ เมสเซอร์ - CSI Detective Third Grade: Danny Messer (แสดงโดย Carmine Giovinazzo) เขาเติบโตมาจากครอบครัวที่เต็มไปด้วยกรอบและระเบียบวินัยในการดำเนินชีวิต แต่ส่วนตัวเขากลับสร้างสไตล์การทำงานตลอดจนการดำเนินชีวิตให้เป็นเอกลักษณ์เฉพาะตัว นั่นคือการผสมผสานแนวความคิดในโลกของพวกที่ไม่ยอมรับและชอบแหกกฎ กับโลกของผู้สร้างกฎและควบคุมมัน เขาเคยทำธุรกิจเกี่ยวกับดนตรีในช่วงเวลาที่สั้น และเคยเป็นนักเบสบอลที่ยอดเยี่ยม เขาเล่นมาตั้งแต่ชั้นประถมจนถึงวิทยาลัย แต่ข้อมือหักระหว่างปะทะคู่ต่อสู้ ทำให้ต้องเลิกเล่นไปในที่สุด หลังจากนั้นเขาไปศึกษาต่อที่ โรงเรียนตำรวจ และสำเร็จการศึกษาเป็นอันดับ 1 ในชั้น เขาได้รับการคัดเลือกเป็นการส่วนตัวจาก แม็ค มาเป็นส่วนหนึ่งของทีม CSI เขาสนิทสนมกับ ดอน แฟล็ค เป็นคนที่ไม่ค่อยเชื่ออะไรง่ายๆ นัก ในฤดูกาลที่ 3 ตอน Snow Day เขาเริ่มมีความสัมพันธ์กันอย่างลึกซึ้งกับเพื่อนร่วมทีม ลินด์เซย์ มอนโร และถูกจับเป็นตัวประกัน พร้อมกับเพื่อนร่วมทีม อดัม อยู่ในคลังสินค้า ในฤดูกาลที่ 5 ตอน The Box แดนนี่ได้รู้ว่าลินด์เซย์กำลังตั้งครรภ์ และในตอน Green Piece แดนนี่ได้แต่งงานกับลินด์เซย์ ในฤดูกาลที่ 6 ตอน Epilogue เขาได้บาดเจ็บจากยิงถล่มบาร์ของกลุ่มคนไม่ทราบชื่อ ทำให้เป็นอัมพาตชั่วคราว ภายหลังเขาก็หายดีตามปรกติ ในตอนท้ายฤดูกาลที่ 7 เขาได้รับการเลื่อนขั้นเป็น สิบตำรวจเอก และเป็นเจ้าหน้าที่สายตรวจ ในฤดูกาลที่ 8 ตอน Officer Involved เขายอมแพ้โดยสมัครใจในการเลื่อนขั้น และกลับมาทำงานที่แล็บอาชญากรรมตามเดิม

• เจ้าหน้าที่พิสูจน์ที่เกิดเหตุ นักสืบระดับ 3 ลินด์เซย์ มอนโร - CSI Detective Third Grade: Lindsay Monroe (แสดงโดย Anna Belknap) เธอเคยทำงานอยู่ในทีม CSI เป็นเวลา 3 ปีที่ มอนแทนา แต่สุดท้ายก็ตัดสินใจตามฝันย้ายมาอยู่ที่ นิวยอร์ก หญิงสาวผู้กระตือรือล้นและพร้อมที่จะเรียนรู้ตลอดเวลา ความกระหายที่จะไขความลับเป็นแรงกระตุ้นให้เธอพร้อมอุทิศชีวิตในการทำงานให้กับทีม CSI เป็นเพราะว่าถิ่นที่เธอกำเนิด ทำให้ แดนนี่ เมสเซอร์ เรียกเธอด้วยความรัก ว่า มอนทาน่า หรือ สาวลูกทุ่ง อยู่เป็นประจำ ตลอดช่วงฤดูกาลที่ 3 เธอพยายามอยู่ห่างจากแดนนี่ตลอดเวลา ในขณะเดียวกัน เธอพยายามลืมความทรงจำที่ถูกกระตุ้น จากความลับในอดีตของเธอที่ผ่านมา (ความทรงจำนั้นก็คือ เพื่อนๆ ของเธอถูกฆาตกรรมทั้งหมด แต่เธอรอดชีวิตเพียงคนเดียว) แต่หลังจากตอน Sleight Out of Hand เธอจึงได้ใกล้ชิดกับแดนนี่มากขึ้น และตอน Snow Day พวกเขามีความสัมพันธ์กันอย่างลึกซึ้ง ในฤดูกาลที่ 5 ตอน The Box เธอได้รับผลการตรวจที่โรงพยาบาลว่าเธอตั้งครรภ์ และในตอน Green Piece ลินด์เซย์ได้แต่งงานกับแดนนี่

• เจ้าหน้าที่นิติวิทยา ด็อกเตอร์ ซิด แฮมเมอร์แบ็ค - Medicial Examiner: Doctor Sid Hammerback (แสดงโดย Robert Joy) เจ้าหน้าที่นิติวิทยา ที่ถูกนิยามคำจำกัดความว่า "Off-the-charts Genius" หรือ "ยอดอัจฉริยะระดับแนวหน้า" ก่อนหน้านี้เคยเป็น หัวหน้าพ่อครัว และมาเป็นเจ้าหน้าที่นิติวิทยา ในเวลาต่อมา เขาเป็นคนชอบพูดและแสดงความคิดเห็นมากเกินไปในบางครั้ง แต่เขาก็มีความเข้าใจที่ลึกซึ้งและความห่วงใยที่จริงใจ ต่อเพื่อนร่วมทีมของเขา (เห็นได้จากการที่เขาเชิญ แม็ค ไปร่วมงาน เทศกาล วันขอบคุณพระเจ้า กับครอบครัวของเขา เพราะไม่อยากให้ แม็ค ใช้ชีวิตในวันหยุดอยู่คนเดียว) ในฤดูกาลที่ 3 ตอน The Ride In เขาเกือบจะเสียชีวิตจากอาการแพ้อย่างรุนแรง อันเนื่องมาจาก แซนด์วิชเนื้อที่เขากินเข้าไป แต่ สเตลล่า ช่วยเหลือไว้ได้ทันเวลา ปัจจุบันเขาแต่งงานแล้ว มีลูกสาว 2 คน ซึ่งคนหนึ่งกำลังศึกษาอยู่ที่ วิทยาลัย และฤดูกาลที่ 5 ตอน Page Turner เขาเกือบจะเสียชีวิต อันเนื่องมาจาก พิษกัมมันตภาพรังสีของผู้เคราะห์ร้าย ในห้องเก็บศพ

• เจ้าหน้าที่เทคนิค ห้องทดลอง อดัม รอส - Laboratory Technician: Adam Ross (แสดงโดย A.J. Buckley) เจ้าหน้าที่แล็บเทคนิค จาก ฟินิกซ์, แอริโซนา เขามีความชำนาญด้าน พิสูจน์ร่องรอยจากหลักฐาน เป็นพิเศษ บางครั้งก็มาพร้อมกับเพื่อนร่วมทีมคนอื่น ไปยังที่เกิดเหตุ เพื่อ สร้าง หรือรวบรวมหลักฐานขึ้นมาใหม่ เขาไม่ชอบหิมะและอากาศเย็น เนื่องจากเขาพูดอยู่เสมอว่าเขามาจาก ฟินิกซ์ และเห็นว่าอากาศที่มีอุณหภูมิต่ำกว่า 85 องศาฟาเรนไฮต์ นั้นเย็นมากสำหรับเขา เขาเคยยอมรับว่า ระหว่างที่เขาเผากระดูกบางอย่างอยู่นั้น ก็ถูกพ่อของเขาข่มขู่และต่อว่า หลังจากนั้นเขาจำได้ว่า จะรู้สึกสะดุ้งและหวาดระแวงเป็นอย่างมากเวลามีใครบางคนตะหวาดและมาตีที่ไหล่เขา ซึ่งทำให้เห็นว่า เขาถูกข่มขู่และทารุณกรรม ตั้งแต่เด็ก เขาได้ให้ความช่วยเหลือ สเตลล่า โดยใช้ชุดทดสอบ PCR เพื่อหาเชื้อ HIV เนื่องจากว่า เธอได้ถูกเศษกระจกบาด จากการตรวจสอบที่เกิดเหตุแห่งหนึ่ง และสงสัยว่าเศษกระจกที่เปื้อนเลือดเหล่านั้นมีเชื้อ HIV ติดอยู่ และภายหลังพบว่าผลเลือดของเธอเป็น ลบ ในฤดูกาลที่ 3 ตอน Snow Day เขากับเพื่อนร่วมทีม แดนนี่ ถูกจับเป็นตัวประกันอยู่ในคลังสินค้า และถูกบุหรี่เผาที่มือของเขาด้วย ฤดูกาลที่ 5 ตอน Enough เขาได้รับจดหมายเตือนเกี่ยวกับเวลาการทำงานของเขาได้สิ้นสุดลงแล้ว อดัม ได้ไปพูดคุยกับ แม็ค ซึ่งเขาก็ไม่ทราบเรื่องนี้ด้วยเช่นกัน แม็ค ได้โต้เถียงกับ หัวหน้านักสืบ ซินแคลร์ เกี่ยวกับการตัดงบประมาณการจ้างเจ้าหน้าที่ เพื่อซื้อเครื่องตรวจ ดีเอ็นเอ เครื่องใหม่ รวมทั้งสเตลล่าในภายหลังด้วย เพราะ เขาต้องการให้เธอยกเลิกการสั่งซื้อเครื่องตรวจ ดีเอ็นเอ เครื่องใหม่ โดยเธอคิดว่าเครื่องตรวจ ดีเอ็นเอ ใหม่ สามารถตามตัวฆาตกรได้รวดเร็วยิ่งขึ้น และ ใช้เจ้าหน้าที่น้อยลง แต่เมื่อสิ้นสุดการโต้เถียง แม็ค เลือกที่จะให้ อดัม อยู่ที่แล็บต่อไป ซึ่งภายหลัง ระหว่างการโต้เถียงของแม็ค และ สเตลล่า เขาก็ได้ยินเรื่องราวนี้ทั้งหมดอยู่ที่หน้าห้อง ในฤดูกาลที่7 ตอน Unfriendly Chat เขาถูกแม็คสั่งพักงาน 3 วัน เพราะแอบแฮ็กเข้าไปในเครื่องคอมพิวเตอร์ของผู้ต้องสงสัย ภายหลัง เขาก็กลับมาทำงานตามปรกติ

• เจ้าหน้าที่พิสูจน์ที่เกิดเหตุ นักสืบระดับ 3 ด็อกเตอร์ เชลดอน ฮอว์คส์ - CSI Detective Third Grade: Doctor Sheldon Hawkes (แสดงโดย Hill Harper) ก่อนหน้านี้เป็นหัวหน้าทีมด้านทีมนิติเวชของทีม CSI ซีรีส์นี้ เขาชื่นชอบความท้าทายในการชันสูตรศพในห้องเงียบๆ เป็นชีวิตจิตใจ ด้วยพรสวรรค์ระดับยอดอัจฉริยะในการเรียน เขาสำเร็จการศึกษาระดับมหาวิทยาลัยตั้งแต่อายุ 18 ปี ตอนอายุ 24 ปี เขาเป็นถึงหนึ่งในสมาชิกทีมศัลยกรรมชั้นนำของ สหรัฐอเมริกา ในฤดูกาลที่ 2 เขาออกจากห้องชันสูตรศพและเริ่มออกงานภาคสนามกับเพื่อนร่วมทีม ในฤดูกาลที่ 3 ตอน Rising Shane เขาถูกจับกุมในฐานะเป็นผู้ต้องสงสัยในคดีปล้นและฆาตกรรมรายหนึ่ง แต่ท้ายที่สุดก็รอดพ้นจากข้อกล่าวหา เพราะ เพื่อนร่วมทีมช่วยกันหาหลักฐานมัดตัว เชนส์ คาเซย์ ฆาตกรต่อเนื่องได้ (ฮอว์คส์ถูก เชน คาเซย์ ใส่ร้าย เนื่องจากก่อนหน้านั้นเขาเคยเป็นเจ้าหน้าที่นิติวิทยา ชันสูตรศพ แลน คาเซย์ ซึ่งเป็นพี่ชายของ เชนส์ คาเซย์ ว่าเป็นการฆ่าตัวตาย แต่เขาไม่เชื่อว่าพี่ชายจะฆ่าตัวตายและแค้นใจมาก จึงได้ฆาตกรรมผู้เกี่ยวที่ข้องกับนี้คดี 3 คนที่เป็นพยาน และฮอว์คส์จึงตกเป็นเป้าหมายคนต่อไป ในฐานะคนที่เคยชันสูตรศพพี่ชายของเขา)

• เจ้าหน้าที่แผนกสืบสวน นักสืบระดับ 1 โดนัล "ดอน" แฟล็ค จูเนียร์ - Homicide Detective First Grade: Donald "Don" Flank Junior (แสดงโดย Eddie Cahill) นักสืบหนุ่มแนวฮาร์ดคอร์ ผู้ช่ำชองและรู้จักถนนทุกสายในนิวยอร์กเป็นอย่างดี ชนิดหลับตาเดินยังได้ เขาเป็นชายหนุ่มประเภทที่ไม่เคยสงสัยและตั้งคำถามเกี่ยวกับอนาคตของตัวเอง ทำหน้าที่เป็น นักสืบในแผนกสืบสวน เขารังเกียจคนเลวเข้ากระดูกดำ ด้วยไหวพริบที่ยอดเยี่ยมและมุมมองด้านนิติเวชอย่างลึกซึ้ง ดอน แฟล็ค ทำงานอย่างใกล้ชิดกับ แม็ค เทย์เลอร์ และเพื่อนร่วมทีมคนอื่นๆ ในทีม CSI ได้เป็นอย่างดี เขาสนิทสนมกับ แดนนี่ และรับฟังปัญหาของ แดนนี่ อยู่เสมอด้วยความเต็มใจ เวลาที่เขามีปัญหา ในฤดูกาลที่ 2 ตอน Charge of this Post เขาได้รับบาดเจ็บจากแรงระเบิด อาการขั้นโคม่า แต่ฤดูกาลที่ 3 อาการดีขึ้นและมาร่วมทีมกับเพื่อนทำงานตามเดิม ฤดูกาลที่ 3 ตอน ...Come Around เขาให้ความช่วยเหลือ แม็ค ในการตอบคำถาม เกี่ยวกับการเสียชีวิตของฆาตกรต่อเนื่อง เคลย์ ด็อบสัน แก่ศาล ฤดูกาลที่ 5 ตอน Veritas น้องสาวของเขาต้องเป็น ผู้ต้องสงสัย ในคดีปล้นธนาคาร ซึ่งภายหลังก็รอดพ้นข้อกล่าวหา ตอน Dead Inside ความจริงถูกเปิดเผยว่า น้องสาวของเขาเป็นคนติดสุราอย่างหนักและ ในตอนท้ายเขามีความสัมพันธ์ที่ค่อนข้างสนิทสนมกับนักสืบ เจสสิก้า แองเจิล ตอน Rush to Jugdement เขาตกที่นั่งลำบากอย่างหนัก เมื่อ ผู้ต้องสงสัยเสียชีวิตในห้องสอบสวน ระหว่างการสอบปากคำ ทำให้เขาถูกยึดตรานักสืบ และ ลดตำแหน่ง ให้ไปนั่งที่โต๊ะประจำตำแหน่งชั่วคราว จนกว่าจะมีการสืบสวนเสร็จ ซึ่งภายหลังก็รอดพ้นข้อกล่าวหา อันเนื่องมาจาก เพื่อนร่วมทีมได้หาหลักฐานมาสนับสนุน