ถนนมาลัยแมน หรือ ทางหลวงแผ่นดินหมายเลข 321 สายนครปฐม–สุพรรณบุรี เป็นถนนขนาด 4 ช่องจราจร ไป–กลับ มีจุดเริ่มต้นจากทางหลวงแผ่นดินหมายเลข 3524 บริเวณสามแยกมาลัยแมน อำเภอเมืองนครปฐม จังหวัดนครปฐม ผ่านอำเภอกำแพงแสน มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ วิทยาเขตกำแพงแสน เข้าสู่เขตจังหวัดสุพรรณบุรี ผ่านอำเภอสองพี่น้อง อำเภออู่ทอง สิ้นสุดที่ทางหลวงแผ่นดินหมายเลข 340 ในเขตอำเภอเมืองสุพรรณบุรี จังหวัดสุพรรณบุรี ระยะทางรวม 106.273 กิโลเมตรถนนมาลัยแมนเดิมมีชื่อเรียกว่า "ทางหลวงแผ่นดินสายนครปฐม-สุพรรณบุรี"[1] ได้รับการตั้งชื่อดังกล่าวเมื่อวันที่ 10 ธันวาคม พ.ศ. 2493[1] ในสมัยที่จอมพล ป. พิบูลสงครามเป็นนายกรัฐมนตรี เพื่อเป็นเกียรติแก่นายปุย มาลัยแมน อดีตหัวหน้ากองคลัง กรมทาง[1]หลังจากที่ก่อสร้างถนนเสร็จแล้ว ทางหลวงแผ่นดินหมายเลข 321 เป็นถนนที่มีความสำคัญที่สุดในสมัยหนึ่ง เนื่องจากเป็นเส้นทางคมนาคมระหว่างจังหวัดสุพรรณบุรีไปยังกรุงเทพมหานคร ผ่านจังหวัดนครปฐม แทนการคมนาคมทางเรือผ่านแม่น้ำนครชัยศรีและทางรถไฟสายชุมทางหนองปลาดุก-สุพรรณบุรี ต่อมาเมื่อทางหลวงแผ่นดินหมายเลข 340 (ตลิ่งชัน–บางบัวทอง–สุพรรณบุรี) ก่อสร้างแล้วเสร็จ ความสำคัญของทางหลวงเส้นนี้จึงเปลี่ยนมาเป็นเส้นทางคมนาคมจากภาคใต้มุ่งหน้าสู่ภาคเหนือโดยไม่ผ่านกรุงเทพมหานครแทน ซึ่งพบว่ามีรถประจำทางปรับอากาศ บขส. สายเชียงใหม่–หัวหิน และสายนครราชสีมา–หัวหินวิ่งผ่านเส้นทางนี้