ทางหลวงสหรัฐอเมริกาหมายเลข 1 (อังกฤษ: U.S. Route 1) ในรัฐฟลอริดา มีระยะทาง 545 ไมล์ (877 กิโลเมตร) มีเส้นทางไปตามแนวชายฝั่งตะวันออกของรัฐจาก คีย์เวสต์ ข้ามแม่น้ำเซนต์แมรี เข้าสู่รัฐจอร์เจีย ทางตอนเหนือของโบโลจ์น (Boulogne) ของรัฐฟลอริดา และทางตอนใต้ของโฟล์กสตัน (Folkston) ของรัฐจอร์เจีย ทางหลวงเส้นนี้ได้ถูกกำหนดให้เป็นเส้นทางผ่านรัฐฟลอริดาเมื่อก่อตั้งระบบทางหลวงสหรัฐอเมริกาในปี ค.ศ. 1926 ถนนนี้ได้รับการดูแลโดยกรมการขนส่งแห่งรัฐฟลอริดา (FDOT)ทางหลวงเส้นนี้มีปลายทางทิศใต้ในคีย์เวสต์ ผ่านทางหลวงโอเวอร์ซีส จากหมู่เกาะต่าง ๆ มุ่งหน้าสู่ทิศเหนือไปยังแผ่นดินใหญ่ เข้าสู่ภาคใต้ของรัฐฟลอริดา ไปยังแจ็กสันวิลล์ มีเส้นทางใกล้กับชายฝั่งมหาสมุทรแอตแลนติกและทางน้ำอินทราโคสทัล เส้นทางส่วนใหญ่ตั้งอยู่ทางทิศตะวันออกของอินเตอร์สเตต 95 ในรัฐฟลอริดา และทางทิศตะวันตกของถนนรัฐฟลอริดา A1A โดยมีเส้นทางขนานกับถนนทั้งสอง เมื่อเข้าสู่ทางตอนเหนือของแจ็กสันวิลล์ ทางหลวงหมายเลข 1 ได้โค้งไปทางแม่น้ำเซนต์แมรีในขณะที่กำลังเข้าสู่รัฐจอร์เจีย