ทไวไลท์โชว์แบ่งการออกอากาศเป็น 3 ช่วง ได้แก่

• ช่วงโชว์ของแปลกหรือโชว์ออฟ (Show Off) ซึ่งจะมีแขกรับเชิญออกมาโชว์สิ่งของต่างๆ ที่หาได้ยาก หรือแปลก
• ช่วงสัมภาษณ์ดารารับเชิญหรือทอล์คโชว์ (Talk Show) โดยที่ดารารับเชิญจะออกมาสัมภาษณ์เรื่องราวต่างๆ ของดารารับเชิญคนนั้น โดยที่ในช่วงสุดท้ายของช่วงนี้จะมีการแจกรูปภาพของดาราที่มาออกรายการไว้เป็นที่ระลึก
• ช่วงโชว์เพลงหรือสเปเชียลโชว์ (Special Show) จะมีศิลปินต่างๆ ออกมาร้องเพลง ซึ่งส่วนใหญ่มักจะเป็นศิลปินกลุ่ม

ทั้ง 3 ช่วงที่กล่าวมาดำเนินมาตลอด 18 ปี และยังคงมีอยู่จนถึงปัจจุบันซึ่งได้เปลี่ยนเป็นรายการคลับเซเวน และทูไนท์โชว์ แต่ในช่วงโชว์ของแปลกได้มีการเปลี่ยนแปลงเป็นการเสนอเรื่องแปลกหรือหาดูได้ยากจากต่างประเทศ ส่วนช่วงโชว์เพลงจะให้ศิลปินนักร้องที่กำลังมีผลงานเพลงออกสู่ตลาดได้โชว์เพลงเพียงเพลงเดียวก่อนปิดรายการ

รายการทไวไลท์โชว์ยังมีช่วงอื่นๆ อีกหลายช่วง ซึ่งดำเนินมาเพียงระยะสั้นๆ หรือระยะยาวจนสิ้นสุดลงตามวาระ ได้แก่

Live Show (เดิมเป็นการแสดงจากกลุ่มขบวนการพยักหน้า ต่อมาเปลี่ยนเป็นการแสดงตลกจากคณะต่างๆ) In Focus (สารคดีเชิงข่าว)ความเป็นไทย

แรงบันดาลใจ คนคุณภาพ คนสู้ชีวิต Indy show เป็นช่วงทีต่อเนื่องจากช่วงโชว์เพลงหรือสเปเชียลโชว์ โดยจะมีศิลปินแนวอินดี้มาร้องเพลง ปี 2546-2549

ไทยลูกทุ่ง ซึ่งเป็นช่วงที่มีนักร้องลูกทุ่งมาร้องเพลง เฉพาะช่วงนี้เริ่มออกอากาศเทปแรกเมื่อวันที่ 5 กุมภาพันธ์ 2538 ออกอากาศเป็น 2 ชั่วโมง เทปสุดท้าย วันที่ 27 มกราคม 2545 ถูกลดเวลาลงจากทางสถานีได้แยกตัวออกมาเป็นรายการทุกเย็นจันทร์-ศุกร์ ไอทีวี เมษายน 2547 ได้กลับออกอากาศครั้ง 7 มิถุนายน 2557