"รอยเปื้อนที่สอง" (อังกฤษ: The Adventure of the Second Stain) เป็นเรื่องสั้นเรื่องหนึ่งใน 56 เรื่องที่เกี่ยวกับเชอร์ล็อก โฮมส์ เขียนโดยอาร์เธอร์ โคนัน ดอยล์ ตีพิมพ์ครั้งแรกในนิตยสารสแตรนด์ในสหราชอาณาจักรในเดือนธันวาคม ค.ศ. 1904 และตีพิมพ์ในนิตยสารคอลเลียร์ในสหรัฐอเมริกาเมื่อวันที่ 28 มกราคม ค.ศ. 1905 เป็นเรื่องสั้นลำดับสุดท้ายจากทั้งหมด 13 เรื่องที่รวบรวมตีพิมพ์ในหนังสือรวมเรื่องสั้น เรื่องสั้นเชอร์ล็อก โฮมส์ ชุด คืนชีพ ในปี ค.ศ. 1905 ดอยล์จัดอันดับให้ "รอยเปื้อนที่สอง" เป็นอันดับที่ 8 ในรายการเรื่องสั้นของโฮมส์ 12 เรื่องที่ชื่นชอบ[1]