จะกล่าวถึงเหตุการณ์ก่อนหน้าอัสแซสซินส์ครีด 2 ตัวเอกของเรื่องคือ Giovanni Auditore เป็นมือสังหารในศตวรรษที่ 15 ช่วงยุคฟื้นฟูศิลปวิทยา ในอิตาลี ซึ่งเป็นพ่อของ Ezio Auditore da Firenze ในช่วงเริ่มต้นของยุคฟื้นฟูศิลปวิทยามีกลุ่มผู้สมรู้ร่วมคิดที่จะล้มล้างตระกูลเมดิซีซึ่งมีอำนาจมากในสมัยนั้น และคิดจะแทรกแซง ความเป็นเอกภาพของอิตาลี ซึ่ง Giovanni จะต้องเผชิญกับภัยคุกคามนี้และจัดการกับคนผิดเพื่อนำความยุติธรรมมาสู่อิตาลี