เอไอเอสลีก ดิวิชั่น 2 ประจำฤดูกาล 2559 เป็นการแข่งขันฟุตบอลลีกระดับที่ 3 ของประเทศไทย โดยจัดแบ่งการแข่งขันเป็น 8 ลีกตามภูมิภาค โดยจะคัดเลือกทีมชนะเลิศและรองชนะเลิศของแต่ละภูมิภาค เพื่อให้ได้ 16 สโมสร มาแข่งในระบบแพ้คัดออก (เหย้า-เยือน) อีกครั้ง โดยอันดับที่ 1-3 จะได้เลื่อนชั้นไปสู่ ไทยลีกแชมเปียนชิป เริ่มจับสลากแบ่งสายแบ่งกลุ่มแยกโซนภายในวันที่ 12-13 มีนาคม 2559 ต่อไป [1] และเริ่มต้นเปิดฤดูกาล 2559 ตั้งแต่วันเสาร์ที่ 19 มีนาคม พ.ศ. 2559 เป็นต้นไป [2]ฤดูกาล 2559 มีสโมสรเข้าร่วมแข่งขัน 94 ทีม แบ่งเป็น 8 โซน ได้แก่ [3]