ตัวละครในเกมโอสุ! ทาทาคาเอะ! โอเอนดันที่ผู้เล่นสามารถเลือกได้นั้น เป็นสมาชิกของทีมเชียร์ ซึ่งแต่ละคนจะเปรียบเสมือนระดับความยากของเกม ซึ่งจะแปรตามในแต่ละด่านคือ จำนวนปุ่มกดและเวลาในการกด โดยยิ่งระดับความยากสูงขึ้น จำนวนปุ่มจะมากขึ้นและมีเวลาในการกดน้อยลง

• ทานากะ ฮาจิเมะ (田中 一) - ตำแหน่งน้องใหม่ในทีม เป็นตัวละครในระดับความยาก "ง่าย"
• อิปปงงิ ริวตะ (一本木 龍太) - ตำแหน่งลีดเดอร์ในทีม เป็นตัวละครในระดับความยาก "ธรรมดา" เขาเป็นตัวละครที่ปรากฏอยู่ในปกหน้าของกล่องเกมและหน้าจอหลักของเกม
• โดเมกิ ไค (百目鬼 魁) - ตำแหน่งประธานทีมเชียร์ เป็นตัวละครในระดับความยาก "ยาก" จะให้เลือกเล่นเมื่อจบเกมในระดับธรรมดาและง่าย
• ซูซูกิ อิตเท็ตสึ และ ไซโต้ อาสึชิ (鈴木 一徹、斉藤 篤) - ปรากฏเคียงคู่กับตัวละครชายทั้ง 3 โดยเป็นลักษณะของผู้ช่วยในการเชียร์ ซูซูกิมีจุดเด่นที่ไว้ผมทรงโมฮอว์คและไซโต้มีจุดเด่นที่ปิดตาข้างหนึ่ง
• เชียร์ลีดเดอร์หญิง (チアガールズ) - เป็นทีมพิเศษที่ เป็นตัวละครในระดับความยาก "ยากมาก" จะให้เลือกเล่นได้เมื่อจบเกมในระดับยาก สมาชิกในทีมได้แก่ อาเมมิยะ ซายากะ (雨宮 沙耶花, ผู้นำ), คันดะ อาโออิ (神田 葵, ใส่แว่น), แอนนา ลินด์เฮิร์ตส (アンナ・リンドハースト, ผมบลอนด์)