รูปแบบการเล่นของ อัสแซสซินส์ครีด โอดิสซี นั้นเป็นการเล่นแบบโอเพนเวิลด์เหมือนภาคที่ผ่านมาโดยได้นำการต่อสู้ทางน้ำแบบในภาค 3 และภาค 4 กลับมาแต่ได้มีการเปลี่ยนแปลงรูปแบบการต่อสู้จากการต่อสู้ด้วยปืนมาใช้การยิงธนูแทน อีกทั้งยังเป็นภาคแรกที่มีระบบบทพูดที่ผู้เล่นสามารถเลือกบทพูดของตัวละครเอกซึ่งจะส่งผลต่อการกระทำของตัวเอกในช่วงต่อไปจนกระทั่งจบเกมนอกจากนี้ยังเป็นภาคแรกที่ผู้เล่นสามารถเลือกตัวละครเอกได้ว่าจะเล่นเป็นตัวละครฝ่ายชายคือ อเล็กซิออส หรือตัวละครฝ่ายหญิงคือ แคสซานดรา ต่างจากภาคซินดิเคทที่ผู้เล่นสามารถเล่นได้ทั้ง 2 เพศโดยทักษะของทั้ง 2 ตัวละครสามารถนำไปพัฒนาความสัมพันธ์กับเอ็นพีซีหรือ ตัวละครที่ผู้เล่นไม่ได้ควบคุม ได้

ทั้ง อเล็กซิออส และ แคสซานดรา เมื่อเริ่มเกมจะรับบทเป็นทหารรับจ้างและสืบเชื้อสายจากกษัตริย์ผู้ยิ่งใหญ่ของสปาร์ตา พระเจ้าลีออนิดัสที่ 1